圖1. 流式細胞術方法驗證工作流程概述
1、特異性
2、靈敏度
圖2. 重復性：批內精密度實驗設計和統計分析示例2。在這個例子中，兩名操作員分別在單獨的分析中對四個樣品進行了三次分析運行。數據也可用于測定間精度。
穩定性驗證包括多個方面：
樣本穩定性：評估不同儲存條件下樣本的變化
處理樣本穩定性：染色固定后至檢測前的時間影響
試劑穩定性：抗體混合試劑的保存期限
評估標準通常是相對于基線值的變化不超過20%，或變化在方法精密度范圍內。
方案1：基礎驗證（研究實驗室適用）
適用于非監管環境的研究實驗室，是最低要求的驗證方案：
驗證參數：特異性、LLOD、精密度（重復性和中間精密度）
實驗設計：單操作者、單儀器
樣本要求：3個以上預期用途樣本
文檔要求：建議有驗證計劃，但非強制
適用于內部決策但不提交監管機構的研究：
擴展參數：增加LLOQ、全面穩定性評估
實驗設計：因子設計，包含2個操作者和2臺儀器
強調文檔規范（良好文檔實踐）
包含樣本穩定性和處理穩定性評估
方案3：中等風險臨床實驗室開發檢測
成功的驗證遵循"說-做-證"三步驟：
邁杰轉化醫學流式平臺目前承接業務如下：
免疫分型：已驗證有60+方法，包括淋巴細胞TBNK分型，T細胞精細分型，B細胞精細分型，細胞增殖活化抑制等方法。
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細胞名稱 |
細胞表型 |
功能 |
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總T細胞 |
CD3+ |
來源于胸腺（Thymus），介導適應性細胞免疫應答，在胸腺依賴性抗原誘導的體液免疫應答中發揮重要輔助作用 |
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輔助性T細胞 （Th） |
CD3+CD4+ |
識別外源性的MHCII類分子，通過分泌細胞因子作用于其他白細胞（如B細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞），從而清除病原體 |
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細胞毒性T細胞 |
CD3+CD8+ |
識別內源性的MHCI類分子（多為內源性的細胞抗原,如病毒感染的細胞和腫瘤細胞等），通過釋放穿孔素、顆粒酶等活性成分，消滅被識別的靶細胞 |
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B細胞 |
CD19+ |
產生抗體介導體液免疫應答，還可提呈可溶性抗原，以及產生細胞因子參與免疫調節 |
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NK細胞 |
CD3-CD56+/(CD16+56)+ |
表達非特異性抗原識別受體，可表達一系列與其活化和抑制相關的調節性受體，并通過上述調節性受體對機體“自身”與“非己”成分的識別，選擇性殺傷病毒感染或腫瘤等靶細胞 |
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NKT細胞 |
CD3+CD56+ |
能大量產生細胞因子，發揮免疫調節作用。也可以激活其他免疫細胞，對抗腫瘤細胞，提高身體細胞免疫特異性。NKT細胞是聯系固有免疫和獲得性免疫的橋梁之一 |
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單核細胞 |
CD14+ |
在趨化因子作用下遷移至全身組織器官，分化發育為巨噬細胞或樹突狀細胞。可以通過炎癥信號分子迅速被吸引到感染區域。單核細胞具有明顯的異質性，在機體免疫應答和炎癥過程中發揮不同作用 |
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中性粒細胞 |
CD66b+ |
是一種吞噬細胞，通過趨化性從血液被吸引到感染組織。通常被認為是先天免疫反應炎癥過程中的主要病原體殺傷細胞。 |
受體占位：實驗室具備單抗藥物，融合蛋白和雙抗藥物的受體占位開發和驗證能力。
流式細胞術方法驗證是一個系統過程，需要根據檢測的預期用途量身定制。隨著技術的發展，如高參數流式細胞術和人工智能輔助分析的出現，驗證策略也需要不斷演進。通過實施系統化的驗證策略，流式細胞術用戶能夠確保其數據質量，推動該技術在更廣泛領域的應用發展。邁杰轉化醫學聚焦免疫治療、靶向治療及化療相關領域，為客戶提供覆蓋藥物研發與臨床應用全流程的生物標志物一站式檢測服務。其中流式平臺不僅在細胞治療領域提供出色的PK,PD檢測服務，也在抗體藥領域提供免疫分型，受體占位等檢測服務。為創新藥物的臨床轉化和精準用藥決策提供堅實的技術支撐。
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